Определение онкомаркера p16ink4a с использованием жидкостной цитологии

Обследование проводится в целях ранней диагностики предраковых состояний и рака шейки матки у женщин. Белок p16 является непрямым маркером развития онкопатологии шейки матки и позволяет выявить клетки, инфицированные ВПЧ с онкогенной трансформацией. Иммуноцитохимическое исследование позволяет с высокой чувствительностью выявить атипичные клетки в мазке и диагностировать ранние предраковые изменения эпителия и рак шейки матки, а также дифференцировать вирусную составляющую дисплазии шейки матки.

Гистологически различают две основные разновидности рака шейки матки: аденокарцинома и плоскоклеточный рак. В настоящее время доказана связь наличия вируса папилломы человека и риска развития рака шейки матки. В России в 2002 году было зарегистрировано 12 285 случаев заболевания раком шейки матки. Данное заболевание наиболее часто встречается у женщин среднего возраста (35–55 лет), в 20 % случаев обнаруживается в возрасте старше 65 лет, в молодом возрасте встречается относительно редко. Следует отметить, что заболеваемость раком шейки матки значительно превышает заболеваемость другими опухолями женской половой системы. В настоящее время выявлены факторы, которые повышают риск заболевания раком шейки матки. К ним относятся:

• раннее начало половой жизни (до 16 лет);
• частая смена сексуальных партнёров (более 2-3 в год);
• курение;
• инфицирование вирусом папилломы человека.

В большинстве случаев фактором риска развития рака является вирус папилломы человека 16-го и 18-го серотипов. Вирусы данных серотипов ответственны за 65–75 % случаев возникновения рака шейки матки. Заражение вирусом происходит преимущественно половым путём (при отсутствии барьерных средств контрацепции).

Несмотря на то что инфицирование при половом контакте с носителем ВПЧ достигает 75 %, в 90 % случаев вирус достаточно быстро уничтожается иммунной системой, и, только если ему удаётся преодолеть иммунную защиту, развивается персистирующее течение заболевания, сопровождающееся изменениями в эпителии шейки матки.

В связи со стёртостью клинических проявлений и отсутствием специфической клиники, наиболее эффективным методом диагностики являются регулярные гинекологические осмотры, призванные выявить ранние стадии злокачественных новообразований. Скрининговым методом, позволяющим выявить рак шейки матки на разных стадиях развития, является цитологическое исследование. Следует отметить, что достаточно часто поздняя диагностика заболевания связана с несвоевременным обращением за медицинской помощью самого пациента при обнаружении им бессимптомно текущего рака шейки матки. Эффективность терапии опухоли на 3-4 стадии в разы ниже, чем на ранних. Организация цитологического скрининга позволила существенно снизить заболеваемость и смертность от рака шейки матки.

Одной из самых современных методик ранней диагностики предраковых состояний и рака шейки матки у женщин является иммуноцитохимическое исследование, которое позволяет с высокой чувствительностью выявить атипичные клетки в мазке и диагностировать ранние предраковые изменения эпителия и рак шейки матки, а также дифференцировать вирусную составляющую дисплазии шейки матки.

Методика иммуноцитохимического исследования соскобов шейки матки с определением белка р16 (включая жидкостную цитологию – окрашивание по Папаниколау) начинается со взятия биоматериала, которое осуществляется даже при отсутствии видимой патологии. Материал берется со всей поверхности шейки матки и из шеечного канала. Так как рак чаще всего развивается в месте соединения плоского эпителия шейки матки с цилиндрическим эпителием цервикального канала, по периметру маточного зева (так называемая зона превращения), соскоб для взятия материала при скрининге должен обязательно включать эту зону и эпителий шеечного канала.

В данном исследовании применяется современная технология приготовления цитопрепаратов – жидкостная цитология. Важной технологической особенностью метода жидкостной цитологии, улучшающей качество исследования, является то, что исследуемый материал берется в специальный стабилизирующий раствор, который обеспечивает его сохранность без разрушения и потери клеток. При этом весь клеточный материал сохраняет без изменения свои морфологические и иммуноцитохимические свойства. Проводилось много исследований, в которых сравнивалась эффективность традиционной техники и жидкостной цитологии, с использованием для подтверждения диагнозов гистологической экспертизы как «золотого стандарта» и оценкой цитопрепаратов согласно классификации TBS (The Bethesda System). Чувствительность традиционного метода колеблется в широком диапазоне значений: 34,5-89 %, а у метода жидкостной цитологии более стабильные значения: 71,4-95 %. На основании этого видно, что метод жидкостной цитологии является более надежным лабораторным тестом, уменьшает количество ложноотрицательных результатов, количество неудовлетворительных для анализа препаратов и время, необходимое цитологу для оценки препарата.

Также причиной большинства (около 2/3) ложных результатов, снижающих точность результатов, является ошибка взятия или переноса материала для приготовления мазков. При переносе материала на стекло традиционным способом клетки целого области шейки матки могут не попасть в препарат. Подсушивание и потеря прилипших к инструменту клеток значительно уменьшает диагностическую информативность микропрепаратов. Метод жидкостной цитологии позволяет исключить эти негативные факторы. Преимущество жидкостной цитологии состоит в том, что она из одного взятия материала способна дать до 5-6 «серийных» (то есть одинаковых по клеточному составу) мазков. Это дает возможность применения дополнительных методов исследований.

Экспрессия р16 связана с низкой, умеренной и тяжелой дисплазией (с внутриэпителиальными плоскоклеточными поражениями шейки матки как высокого, так и низкого Grade, LSIL и HSIL, соответственно классификации ВОЗ), причем экспрессия р16 не встречалась в плоском эпителии без признаков дисплазии. В то же время, хотя отмечалась четкая корреляция обнаружения ДНК вируса папилломы человека с дисплазиями, имелось также большое количество ПЦР-позитивных на HPV случаев (с эписомальной локализацией HPV), в которых при последующем гистологическом исследовании отсутствовал предрак и рак. Данное явление подтверждалось негативной иммуноцитохимической реакцией на р16ink4α в диспластических клетках.

Что определяет

• Для исследования при наличии клинико-анамнестических признаков (эрозия, лабораторно подтвержденное инфицирование ВПЧ), позволяющих заподозрить онкологический процесс в шеечной части матки.
• Для исследования во всех случаях атипической цитологии (кроме инвазивного рака шейки матки), неопределенных цитологических заключениях (атипические клетки плоского эпителия неясного значения) и всех изменений железистого эпителия.
• Для исследования при выявлении высокоаномальной кольпоскопической картины, не сопровождающейся изменениями в цитологическом мазке.
• Для наблюдения за пациентками, прошедшими органосохраняющее лечение по поводу «тяжелой дисплазии» или «рака in situ», в целях повышения чувствительности цитологического исследования.

Подготовка к исследованию

Подготовка не требуется

Срок выполнения

до 5 дней.

Показания

• Плановое обследование женщин независимо от наличия или отсутствия патологии шейки матки необходимо проводить всем живущим половой жизнью женщинам в возрасте от 21 до 64 лет. Впервые ПАП-тест рекомендуют делать в 21 год или через 3 года от начала половой жизни, затем, по рекомендации ВОЗ, 1 раз в год при ежегодном визите к гинекологу; при 3-кратном отрицательном результате — через 2-3 года до 65 лет.
• При наличии патологии шейки матки.
• При контроле за эффективностью лечения патологии шейки матки.

Биоматериал

Соскоб эпителия цервикального канала, эпителия шейки матки